5 / 5 (โหวต: 1 )
ทุกวันนี้ เป็นเรื่องปกติที่จะพบยาคุณภาพต่ำและยาหลอกที่ทำให้ผู้บริโภคสงสัยในประสิทธิภาพ มีวิธีการวิเคราะห์ยาบางอย่างที่ช่วยในการกำหนดองค์ประกอบของยา ลักษณะเฉพาะที่มีความแม่นยำสูงสุด และจะเปิดเผยระดับของอิทธิพลของยาในร่างกายมนุษย์ หากคุณมีข้อร้องเรียนบางประการเกี่ยวกับยา การวิเคราะห์ทางเคมีและความคิดเห็นที่เป็นกลางของยานั้นอาจเป็นหลักฐานในการดำเนินคดีทางกฎหมายใดๆ
วิธีการวิเคราะห์ยาที่ใช้ในห้องปฏิบัติการ?
ในการสร้างลักษณะเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณของยาในห้องปฏิบัติการเฉพาะทาง มีการใช้วิธีการต่อไปนี้อย่างแพร่หลาย:
- ทางกายภาพและทางเคมีกายภาพซึ่งช่วยกำหนดอุณหภูมิการหลอมและการทำให้แข็งตัว ความหนาแน่น องค์ประกอบ และความบริสุทธิ์ของสิ่งเจือปน ค้นหาเนื้อหาของโลหะหนัก
- เคมี, กำหนดการปรากฏตัวของสารระเหย, น้ำ, ไนโตรเจน, ความสามารถในการละลายของสารยา, กรด, จำนวนไอโอดีน, ฯลฯ
- ทางชีวภาพช่วยให้คุณทดสอบสารสำหรับความเป็นหมัน, ความบริสุทธิ์ของจุลินทรีย์, เนื้อหาของสารพิษ
วิธีการวิเคราะห์ยาจะทำให้สามารถสร้างความถูกต้องขององค์ประกอบที่ประกาศโดยผู้ผลิตและกำหนดความเบี่ยงเบนเล็กน้อยจากบรรทัดฐานและเทคโนโลยีการผลิต ห้องปฏิบัติการของ ANO "ศูนย์ความเชี่ยวชาญทางเคมี" มีอุปกรณ์ที่จำเป็นทั้งหมดสำหรับการศึกษายาประเภทต่างๆ อย่างแม่นยำ ผู้เชี่ยวชาญที่มีคุณสมบัติสูงใช้วิธีการที่หลากหลายในการวิเคราะห์ยาและจะให้ความเห็นจากผู้เชี่ยวชาญอย่างเป็นกลางในเวลาที่สั้นที่สุด
ตัวทำละลายที่ไม่ใช่น้ำถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิเคราะห์ทางเภสัชกรรมสมัยใหม่ หากก่อนหน้านี้ตัวทำละลายหลักในการวิเคราะห์คือน้ำ ตอนนี้ก็ยังใช้ตัวทำละลายที่ไม่ใช่น้ำหลายชนิดพร้อมกัน (กรดน้ำแข็งหรือกรดอะซิติกที่ปราศจากน้ำ, อะซิติกแอนไฮไดรด์, ไดเมทิลฟอร์มาไมด์, ไดออกเซน ฯลฯ ) ซึ่งช่วยให้การเปลี่ยนแปลงความแข็งแรงของความเป็นด่างและความเป็นกรดของ สารที่วิเคราะห์ ไมโครเมธอดได้รับการพัฒนา โดยเฉพาะอย่างยิ่ง วิธีการวิเคราะห์แบบหยด ซึ่งสะดวกสำหรับใช้ในการควบคุมคุณภาพของยาภายในร้านขายยา
ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา วิธีการวิจัยดังกล่าวได้รับการพัฒนาอย่างกว้างขวาง โดยใช้วิธีต่างๆ ร่วมกันในการวิเคราะห์สารทางยา ตัวอย่างเช่น โครมาโตกราฟี-แมสสเปกโตรเมตรีเป็นการผสมผสานระหว่างโครมาโตกราฟีและแมสสเปกโตรเมทรี ฟิสิกส์ เคมีควอนตัม และคณิตศาสตร์กำลังเจาะระบบการวิเคราะห์ทางเภสัชกรรมสมัยใหม่มากขึ้น
การวิเคราะห์ตัวยาหรือวัตถุดิบใดๆ จะต้องเริ่มจากการตรวจภายนอก โดยให้ความสนใจกับสี กลิ่น รูปทรงคริสตัล ภาชนะ บรรจุภัณฑ์ สีแก้ว หลังจากการตรวจสอบภายนอกของวัตถุประสงค์ของการวิเคราะห์ จะมีการสุ่มตัวอย่างโดยเฉลี่ยสำหรับการวิเคราะห์ตามข้อกำหนดของกองทุนโลก X (หน้า 853)
วิธีการศึกษาสารยาแบ่งออกเป็น กายภาพ เคมี กายภาพ-เคมี ชีวภาพ
วิธีการวิเคราะห์ทางกายภาพเกี่ยวข้องกับการศึกษาคุณสมบัติทางกายภาพของสารโดยไม่ต้องใช้ปฏิกิริยาเคมี ได้แก่ การกำหนดความสามารถในการละลาย ความโปร่งใส
- หรือระดับความขุ่นของสี การหาความหนาแน่น (สำหรับสารของเหลว) ความชื้น จุดหลอมเหลว การแข็งตัว จุดเดือด เทคนิคที่เหมาะสมได้อธิบายไว้ใน SP X .(p. 756-776)
วิธีการวิจัยทางเคมีขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาเคมี สิ่งเหล่านี้รวมถึง: การกำหนดปริมาณเถ้า ปฏิกิริยาของสิ่งแวดล้อม (pH) ตัวบ่งชี้เชิงตัวเลขของน้ำมันและไขมัน (หมายเลขกรด หมายเลขไอโอดีน หมายเลขสะพอนิฟิเคชัน ฯลฯ)
เพื่อวัตถุประสงค์ในการระบุสารทางการแพทย์ จะใช้เฉพาะปฏิกิริยาดังกล่าวที่มาพร้อมกับผลกระทบภายนอกที่มองเห็นได้ เช่น การเปลี่ยนแปลงสีของสารละลาย วิวัฒนาการของก๊าซ การตกตะกอนหรือการสลายตัวของตะกอน เป็นต้น
วิธีการวิจัยทางเคมียังรวมถึงวิธีน้ำหนักและปริมาตรของการวิเคราะห์เชิงปริมาณที่นำมาใช้ใน การวิเคราะห์ทางเคมี(วิธีการทำให้เป็นกลาง, การตกตะกอน, วิธีการรีดอกซ์ ฯลฯ ) ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การวิเคราะห์ทางเภสัชกรรมได้รวมวิธีการวิจัยทางเคมีไว้ด้วย เช่น การไทเทรตในตัวกลางที่ไม่ใช่น้ำ การวัดเชิงซ้อน
การวิเคราะห์เชิงคุณภาพและเชิงปริมาณของสารอินทรีย์ตามกฎจะดำเนินการตามลักษณะของกลุ่มการทำงานในโมเลกุล
โดยใช้ วิธีการทางกายภาพและเคมีศึกษาปรากฏการณ์ทางกายภาพที่เกิดขึ้นจาก ปฏิกริยาเคมี. ตัวอย่างเช่น ในวิธีคัลเลอริเมตริก ความเข้มของสีจะถูกวัดโดยขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของสาร ในการวิเคราะห์การนำไฟฟ้า การวัดค่าการนำไฟฟ้าของสารละลาย เป็นต้น
วิธีการทางเคมีกายภาพรวมถึง: ออปติคัล (refractometry, polarimetry, emission และ fluorescent วิธีการวิเคราะห์, photometry รวมถึง photocolorimetry และ spectrophotometry, nephelometry, turbodimetry), ไฟฟ้าเคมี (potentiometric และ polarographic method), วิธีโครมาโตกราฟี
การรวมกันของวิธีการสำหรับการกำหนดปริมาณของยา
การหาปริมาณเป็นขั้นตอนสุดท้ายในการวิเคราะห์ทางเภสัชกรรม การเลือกวิธีการที่เหมาะสมที่สุดในการกำหนดปริมาณขึ้นอยู่กับความสามารถในการประเมินยาโดยส่วนที่ใช้งานทางเภสัชวิทยาของโมเลกุล ในทางปฏิบัติ การทำเช่นนี้ทำได้ยาก ดังนั้นโดยปกติการกำหนดปริมาณของยาจะดำเนินการโดยคุณสมบัติทางเคมีอย่างใดอย่างหนึ่งที่เกี่ยวข้องกับการมีอยู่ของหมู่ฟังก์ชันหนึ่งหรืออีกกลุ่มหนึ่ง อะตอม ไอออนบวก หรือประจุลบ และในบางกรณีตามปริมาณ ของกรดแร่ที่เกี่ยวข้องกับเบสอินทรีย์ ตัวอย่างเช่น:ปาปาเวอรีนไฮโดรคลอไรด์สามารถหาปริมาณได้ด้วยกรดไฮโดรคลอริกที่ถูกผูกไว้ แต่อนุญาตเฉพาะกับการวิเคราะห์อย่างรวดเร็วในร้านขายยาเท่านั้น
การวิเคราะห์สารของสารยาและรูปแบบยามีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ เงื่อนไขสำหรับการใช้วิธีการวิเคราะห์เชิงปริมาณในรูปแบบยาขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของส่วนผสมของยาและคุณสมบัติทางเคมีกายภาพของส่วนผสมทั้งหมด เมื่อวิเคราะห์ของผสมยาที่มีหลายองค์ประกอบ จะใช้สองวิธี: การกำหนดเชิงปริมาณโดยไม่ต้องแยกส่วนผสมในขั้นต้นและด้วยการแยก เมื่อเลือกวิธีการทดสอบโดยไม่แยกส่วนผสม ต้องใช้ความระมัดระวังเพื่อให้แน่ใจว่าส่วนผสมที่เกี่ยวข้องไม่รบกวนผลการทดสอบ
การจำแนกวิธีการสำหรับการกำหนดปริมาณของสารยา
|
ทางกายภาพ |
เคมี |
ฟิสิกส์เคมี |
ชีวภาพ |
|
1. การกำหนดความหนาแน่น 2. อุณหภูมิเดือด |
1. การวัดแรงโน้มถ่วง 2. วิธีการ Titrimetric: การไทเทรตปริมาณน้ำฝน กรดเบส; การไตเตรทรีดอกซ์; ความซับซ้อน; ไนไตรโตเมตรี 3. การวิเคราะห์ธาตุ 4. วิธีแกสโซเมตริก |
1. วิธีการดูดซึม 2. วิธีการทางแสง 3. วิธีการขึ้นอยู่กับการแผ่รังสี 4. วิธีการขึ้นอยู่กับการใช้สนามแม่เหล็ก 5. ไฟฟ้าเคมี 6. วิธีการแยก 7. วิธีการระบายความร้อน |
1. การทดสอบความเป็นพิษ 2. การทดสอบ pyrogenicity 4. ความบริสุทธิ์ทางจุลชีววิทยา |
วิธีการทางกายภาพ
วิธีการเหล่านี้ใช้ในการหาปริมาณ ตัวอย่างเช่น, เอทิลแอลกอฮอล์. FS แนะนำให้ตั้งค่าปริมาณเอทิลแอลกอฮอล์ตามความหนาแน่น หรือโดยจุดเดือดของสารละลายแอลกอฮอล์ในน้ำ (รวมถึงทิงเจอร์) ตามวิธีการของ OFS GF
วิธีการทางเคมี
1. วิธีน้ำหนัก (gravimetry)
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับข้อเท็จจริงที่ว่าจากสารทดสอบที่ถ่ายในรูปแบบของตัวอย่างที่แม่นยำบนเครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์หรือในปริมาตรที่แน่นอน วัดด้วยบิวเรตต์หรือปิเปต ส่วนประกอบในรูปของตะกอนจะถูกแยกออกผ่านสารเคมี ปฏิกิริยา ตะกอนนี้จะถูกกรองและชั่งน้ำหนัก ในการคำนวณเนื้อหาเชิงปริมาณของสารในการเตรียมการจะใช้สูตร วิธีการนี้มีความแม่นยำสูงแต่ต้องใช้ความพยายามอย่างมาก
เกลือควินีนถูกกำหนดในเชิงปริมาณเชิงกราวิเมตริก ซึ่งภายใต้การกระทำของสารละลายอัลคาไล จะก่อให้เกิดการตกตะกอนของเบสควินิน ลคาลอยด์ตกตะกอนเป็น picrates; เกลือโซเดียมของ barbiturates ซึ่งภายใต้การกระทำของกรดจะก่อให้เกิดการตกตะกอนในรูปแบบที่เป็นกรด วิตามินบางชนิดที่สร้างผลิตภัณฑ์ไฮโดรไลซิสที่ไม่ละลายน้ำ
2. วิธีการ Titrimetric (ปริมาตร)
ใช้แรงงานน้อยกว่าวิธีกราวิเมตริกอย่างมีนัยสำคัญ และมีความแม่นยำสูงเพียงพอ
การไทเทรตปริมาณน้ำฝน
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการใช้ปฏิกิริยาตกตะกอนหรือการก่อตัวของสารประกอบที่แยกตัวออกจากกันเล็กน้อย
อาร์เจนโทเมตรี
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของการตกตะกอนของเฮไลด์ด้วยสารละลายซิลเวอร์ไนเตรต
KCI + AgNO 3 → AgCI ↓ + KNO 3 E \u003d M.m.
การไทเทรตโดยตรง: วิธีการของ Mohr: ตัวกลางเป็นกลาง, อินดิเคเตอร์ - โพแทสเซียมโครเมต, กำหนด Cl - และ Br - วิธีการเผา:ตัวกลางกรดอะซิติก, ตัวบ่งชี้ - ฟลูออเรสซิน (Cl -) และโซเดียมอีโอซิเนต (I -, Br -)
การไตเตรทกลับ(โรดาโนเมทรี, ไธโอไซยาโนเมตรี): วิธีโฟลการ์ด:ตัวกลางกรดไนตริก ตัวบ่งชี้ - เหล็ก แอมโมเนียม สารส้ม ไทแทรนต์ - AgNO 3 และ NH 4 CNS สีแดงปรากฏขึ้นที่จุดสมมูล วิธีโฟลการ์ดทางอ้อม:ขั้นแรก หลังจากเติมสารละลาย 0.1 M ของ NH 4 CNS 0.1 มล. สีแดงจะปรากฏขึ้นจากการโต้ตอบกับตัวบ่งชี้ จากนั้นจึงไทเทรตด้วยสารละลาย AgNO 3 จนกระทั่งเปลี่ยนสี
เฮไลด์โลหะอัลคาไล, เบสควอเทอร์นารีแอมโมเนียม, เกลือของกรดไฮโดรฮาลิกของเบสอินทรีย์, ซัลฟาไมด์จะถูกกำหนดโดยอาร์เจนโทเมตริก
ตัวอย่างเช่น: ซัลโฟนาไมด์สร้างเกลือเงินในรูปของตะกอนสีขาว
วิธีการอาร์เจนโทเมตริกมีลักษณะเฉพาะด้วยความไวสูง ความถูกต้อง และความสามารถในการทำซ้ำ และดำเนินการได้ง่าย อย่างไรก็ตาม การบริโภคเงินราคาแพงจำนวนมากจำเป็นต้องเปลี่ยนอย่างเร่งด่วน
ปรอท
วิธีการนี้มีพื้นฐานอยู่บนการก่อตัวของสารประกอบปรอท (II) ที่แยกออกอย่างอ่อน
จุดสมมูลถูกกำหนดโดยโพเทนชิโอเมตริกหรือด้วยความช่วยเหลือของตัวบ่งชี้ - ไดฟีนิลคาร์บาไซด์หรือไดฟีนิลคาร์บาโซนซึ่งก่อตัวเป็นสารประกอบสีแดงม่วงที่มีไอออนปรอท (II) มากเกินไป
เมื่อวิเคราะห์ไอโอไดด์ก็เป็นไปได้ วิธีการที่ไม่มีตัวบ่งชี้.
2KI + Hg (NO 3) 2 → HgI 2 ↓ + 2KNO 3 (ตกตะกอนสีแดง)
HgI 2 + 2 KI → K 2 HgI 4 (ไม่มีสี)
K 2 HgI 4 + Hg (NO 3) 2 → 2HgI 2 ↓ + 2KNO 3 (ตกตะกอนสีแดง)
E \u003d 2 M.m. ไทเทรตไปที่เมฆสีแดงที่เสถียร
การไทเทรตกรด-เบส (วิธีการทำให้เป็นกลาง)
เหล่านี้เป็นวิธีการสำหรับการกำหนดปริมาณของสารยาที่มีคุณสมบัติเป็นกรดและพื้นฐานในตัวกลางที่เป็นน้ำหรือไม่ใช่น้ำ
สารที่ละลายน้ำได้ซึ่งมีคุณสมบัติเป็นกรดจะถูกไตเตรทด้วยด่างแก่ (ด่าง) และสารพื้นฐานที่มีสารละลายของกรดแก่ (การวัดความเป็นกรด) ตัวบ่งชี้ที่ใช้บ่อยที่สุดสำหรับการไทเทรต ได้แก่ เมทิลออเรนจ์ เมทิลเรด บรอมไทมอลบลู ฟีนอฟทาลีน ไทมอลฟทาลีน
|
การวัดความเป็นกรด |
ค่าความเป็นด่าง |
|
การไตเตรทโดยตรง ไทเทรตด้วยกรดไฮโดรคลอริก เกลือโซเดียมของกรดอนินทรีย์ ตัวอย่างเช่น: NaHCO 3 + HCl → NaCl + CO 2 + H 2 O |
การไตเตรทโดยตรง ไทเทรตกรดอนินทรีย์ สารของโครงสร้างเฮเทอโรไซคลิกที่มีกลุ่ม -COOH ในโมเลกุล ตัวอย่างเช่น: HCl + NaOH → NaCl + H 2 O |
|
การไตเตรทกลับ (ร่วมกับไฮโดรไลซิส) สารในยาซึ่งเป็นเอสเทอร์หรือเอไมด์จะถูกไฮโดรไลซ์เบื้องต้นด้วยสารละลายอัลคาไล ซึ่งส่วนเกินจะถูกไตเตรทด้วยกรด + 2NaOH → CH 3 COOHa + H 2 O NaOH + HCl → NaCl + H2O |
การไตเตรทกลับ (ร่วมกับไฮโดรไลซิส) การไฮโดรไลซิสของเอสเทอร์หรือเอไมด์มักจะดำเนินการด้วยสารละลายกรดไทเทรต และส่วนเกินจะถูกไตเตรทด้วยด่าง (เช่น urotropine) ทำการทดลองควบคุมควบคู่กันไป |
|
คำนิยามทางอ้อม Theobromine และ theophylline alkaloids ตกตะกอนด้วยซิลเวอร์ไอออน และปล่อยกรดไนตริกออกมาในปริมาณที่เท่ากัน ซึ่งจะถูกไตเตรทด้วยอัลคาไล N-H + AgNO 3 → N-Ag ↓ + HNO 3 HNO 3 + NaOH → NaNO 3 + H 2 O |
|
|
การไทเทรตในตัวทำละลายผสม |
|
|
บางครั้งเบสอินทรีย์จะถูกสกัดด้วยคลอโรฟอร์มหรืออีเทอร์ ตัวทำละลายจะถูกกลั่นและเบสจะถูกไทเทรตโดยวิธีความเป็นกรด N− + HCI → N− . HCI |
ตัวทำละลายผสมประกอบด้วยน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์ ใช้เมื่อยาละลายได้ไม่ดีในน้ำหรือสารละลายในน้ำมีคุณสมบัติเป็นกรดหรือด่างเล็กน้อย ตัวอย่างเช่น: กรดซาลิไซลิกละลายในแอลกอฮอล์และไทเทรตด้วยสารละลายที่เป็นน้ำของ NaOH สารยาบางชนิด เมื่อละลายในตัวทำละลายผสม จะเปลี่ยนคุณสมบัติของกรด-เบส ตัวอย่างเช่น:กรดบอริกเมื่อละลายในส่วนผสมของน้ำและกลีเซอรีนจะช่วยเพิ่ม คุณสมบัติของกรดเนื่องจากการก่อตัวของกรด diglycerinoboric monobasic ตัวทำละลายผสม(แอลกอฮอล์ + น้ำหรืออะซิโตน + น้ำ) ใช้สำหรับไทเทรตซัลโฟนาไมด์ที่เป็นด่าง ตัวทำละลายที่เข้ากันไม่ได้(น้ำ + คลอโรฟอร์ม) ใช้ในการหาปริมาณเกลือของเบสอินทรีย์ (เช่น อัลคาลอยด์ โนเคน) คลอโรฟอร์มสกัดจากเฟสที่เป็นน้ำของเบสอินทรีย์ที่ปล่อยออกมาระหว่างการไทเทรตด้วยอัลคาไล น- . HCI + NaOH → N - ↓ + NaCI + H 2 O |
|
วิธี oxime ขึ้นอยู่กับการทำให้เป็นกลางของกรดไฮโดรคลอริกในปริมาณที่เท่ากันซึ่งปล่อยออกมาจากปฏิกิริยาของไฮดรอกซิลามีนไฮโดรคลอไรด์กับอนุพันธ์ของคีโต (เช่น การบูร): C \u003d O + NH 2 OH HCl → C \u003d N-OH ↓ + HCl + H 2 O HCl + NaOH → NaCl + H2O |
|
|
การไทเทรตในตัวทำละลายที่ไม่ใช่น้ำ (ไทเทรตที่ไม่ใช่น้ำ) |
|
|
การไตเตรทกลับ (ผสมกับเอสเทอริฟิเคชัน) แอลกอฮอล์และฟีนอลบางชนิด (เช่น กลีเซอรอล ไซเนสตรอล) ถูกอะซิติเลตในตัวกลางที่ไม่ใช่น้ำที่มีอะซิติกแอนไฮไดรด์ จากนั้นอะซิติกแอนไฮไดรด์ส่วนเกินที่ถูกทำให้ร้อนด้วยน้ำจะถูกแปลงเป็นกรดอะซิติกซึ่งถูกไตเตรทด้วยอัลคาไล 2R-OH + (CH 3 CO) 2 O → 2R- O - C -CH 3 + H 2 O (CH 3 CO) 2 O เช่น + H 2 O → 2CH 3 COOH 2CH 3 COOH + 2NaOH → 2CH 3 COONa + 2 H 2 O ทำการทดลองควบคุมควบคู่กันไป |
|
|
เบสอินทรีย์และเกลือของพวกมัน ( ตัวอย่างเช่น: คาเฟอีน, ฟติวาซิด) แสดงคุณสมบัติพื้นฐานที่อ่อนแอ ดังนั้นการไทเทรตจะดำเนินการโดยใช้กรดอะซิติกที่ปราศจากน้ำหรืออะซิติกแอนไฮไดรด์เป็นตัวทำละลาย ไทแทรนต์คือสารละลายของกรดเปอร์คลอริกในกรดอะซิติกที่ปราศจากน้ำ ตัวบ่งชี้คือคริสตัลไวโอเล็ตในกรดอะซิติกปราศจากน้ำ ฐานอินทรีย์ที่อ่อนแอเมื่อ dis- การสร้างกรดอะซิติกปราศจากน้ำ กลายเป็นฐานที่แข็งแกร่ง: R 3 N + CH 3 COOH → R 3 N + - H + CH 3 COO - เมื่อเตรียมไทแทรนต์ จะเกิดเปอร์คลอเรตไอออนและอะซีโทเนียมไอออน: CH 3 COOH + HClO 4 → ClO 4 - + CH 3 COOH 2 + เมื่อไตเตรท: CH 3 COO - + CH 3 COOH 2 + → 2 CH 3 COOH และ R 3 N + - H + ClO 4 - → [R 3 N + - H] ClO 4 - ควอเทอร์นารีแอมโมเนียมเฮไลด์และเกลือของกรดไฮโดรฮาลิกไม่สามารถไตเตรทได้อย่างแม่นยำในตัวกลางที่ไม่ใช่น้ำ เนื่องจากไอออนของฮาโลเจนมีคุณสมบัติที่เป็นกรดแม้ในกรดอะซิติกที่ปราศจากน้ำ ดังนั้นพวกมันจึงถูกไตเตรทเมื่อมี (CH 3 COO) 2 Hg (คุณสามารถใช้ส่วนผสมของกรดฟอร์มิกกับอะซิติกแอนไฮไดรด์ 1:20) ในขณะที่ไอออนของฮาโลเจนจับกับสารประกอบที่แยกตัวออกเล็กน้อย ตัวอย่างของไดเฟนไฮดรามีน, ไดบาซอล, โพรเมดอล, อีเฟดรีน ไฮโดรคลอไรด์ |
สารอินทรีย์ที่มีคุณสมบัติเป็นกรดอ่อน ( ตัวอย่างเช่น:ฟีนอล บาร์บิทูเรต ซัลโฟนาไมด์) ถูกไทเทรตโดยใช้ DMF เป็นตัวทำละลาย ไทแทรนต์เป็นสารละลายของ NaOH ใน CH 3 OH หรือสารละลายของโซเดียมเมทออกไซด์ ตัวบ่งชี้คือไทมอลสีน้ำเงิน R−OH + H−C−N−CH 3 → R−O - + H−C−N−CH 3 R−O - + CH 3 ONa → R−ONa + CH 3 O - CH 3 O - + H−C−N−CH 3 → CH 3 OH + H−C−N−CH 3 ข้อเสียของการไทเทรตแบบไม่ใช้น้ำคือความต้องการหน่วยไทเทรตแบบปิดผนึก งานดำเนินการด้วยตัวทำละลายระเหยที่เป็นพิษสูง |
การไทเทรตรีดอกซ์
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการใช้คุณสมบัติการออกซิไดซ์และการลดของสารที่วิเคราะห์และตามด้วยไทแทรนต์
เปอร์แมงกานาโตเมตรี
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการใช้คุณสมบัติการออกซิไดซ์ของไทแทรนต์ - โพแทสเซียมเปอร์แมงกาเนตในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรดอย่างแรง สำหรับการไทเทรตโดยตรงตัวบ่งชี้คือตัวไทแทรนต์ ซึ่งส่วนเกินจะทำให้สารละลายมีสีชมพู
วิธีนี้ใช้ในการไตเตรทลดธาตุเหล็กและไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์
2 KMnO 4 + 5 H 2 O 2 + 3 H 2 SO 4 → 2 MnSO 4 + K 2 SO 4 + 8 H 2 O + 5 O 2
ในระหว่างการไตเตรทกลับไทแทรนต์ส่วนเกินจะถูกกำหนดโดยวิธีไอโอโดเมตริก กำหนดปริมาณโดยการไตเตรทกลับของโซเดียมไนไตรท์
5 NaNO 2 + 2 KMnO 4 + 3 H 2 SO 4 → 5 NaNO 3 + 2 MnSO 4 + K 2 SO 4 + 3 H 2 O
2 KMnO 4 + 10 KI + 8 H 2 SO 4 → 2 MnSO 4 + 5 I 2 + 6 K 2 SO 4 + 8 H 2 O
ตัวบ่งชี้คือแป้ง
สามมิติ
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการใช้คุณสมบัติการออกซิไดซ์ของไอโอดีนอิสระและคุณสมบัติการรีดิวซ์ของไอออนไอโอไดด์: I 2 + 2ē ↔ 2I -
วิธีนี้จะกำหนดสารทางการแพทย์ที่สามารถออกซิไดซ์หรือลดลงได้ รวมทั้งสามารถสร้างผลิตภัณฑ์ทดแทนด้วยไอโอดีนได้ ในทางไอโอโดเมตริก เป็นไปได้ที่จะกำหนดส่วนเกินของไทแทรนต์ในวิธีรีเวิร์สเปอร์แมงกาโนเมตริก ไอโอโดเมตริก ไอโอดาโตเมตริก และโบรมาโตเมตริก
การไตเตรทโดยตรงไอโอดีนใช้เพื่อกำหนดโซเดียมไธโอซัลเฟต
2 Na 2 S 2 O 3 + I 2 → Na 2 S 4 O 6 + 2 NaI
ตัวบ่งชี้คือแป้ง
ย้อนกลับการกำหนดไอโอโดเมตริกขึ้นอยู่กับการออกซิเดชันของอัลดีไฮด์กับไอโอดีนในตัวกลางที่เป็นด่าง: I 2 + 2 NaOH → NaOI + NaI + H 2 O
R-C-H + NaOI + NaOH → R-C-ONa + NaI + H 2 O
จากนั้นเติมกรดซัลฟิวริกส่วนเกิน ไฮโปไอโอไดด์ที่ไม่ทำปฏิกิริยาจะถูกเปลี่ยนเป็นไอโอดีน ซึ่งถูกไตเตรทด้วยโซเดียมไธโอซัลเฟต:
NaOI + NaI + H 2 SO 4 → I 2 + Na 2 SO 4 + H 2 O
I 2 + 2 Na 2 S 2 O 3 → Na 2 S 4 O 6 + 2 NaI
ตัวบ่งชี้คือแป้งซึ่งเป็นสารประกอบสีน้ำเงินที่มีไอโอดีน
ในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่าง furacillin จะถูกออกซิไดซ์ด้วยไอโอดีน การออกซิเดชันของ isoniazid จะดำเนินการในสารละลายโซเดียมไบคาร์บอเนต การกำหนดไอโอโดเมทริกของเมไทโอนีนและยาทางทวารหนักนั้นขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาออกซิเดชันของกำมะถัน เพนิซิลลินจะถูกออกซิไดซ์ด้วยไอโอดีนหลังจากกรดไฮโดรไลซิส
สำหรับการกำหนดเชิงปริมาณ ยังใช้การรวมกันของปฏิกิริยาการแทนที่หรือการตกตะกอนด้วยไอโอโดเมตรี ด้วยความช่วยเหลือของสารละลายไอโอดีนไทเทรตอนุพันธ์ไอโอดีนของฟีนอลเอมีนอะโรมาติกหลัก antipyrine รวมถึงการตกตะกอนของโพลีไอโอไดด์ของอัลคาลอยด์ขององค์ประกอบ ∙ HI ∙ I 4 ได้รับ ตะกอนที่เป็นผลลัพธ์จะถูกกรองออก และไอโอดีนที่มากเกินไปในสิ่งกรองจะถูกไตเตรทด้วยโซเดียมไธโอซัลเฟต
คุณสมบัติการลดการใช้โพแทสเซียมไอโอไดด์ เมื่อไตเตรทสารทดแทน.
สารยาที่แสดงคุณสมบัติของตัวออกซิไดซ์จะปล่อยไอโอดีนอิสระในปริมาณที่เท่ากันเมื่อทำปฏิกิริยากับโพแทสเซียมไอโอไดด์ ไอโอดีนอิสระที่ปล่อยออกมาจะถูกไตเตรทด้วยโซเดียมไธโอซัลเฟต วิธีนี้กำหนดปริมาณไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ โพแทสเซียมเปอร์แมงกาเนต สารฟอกขาว คลอรามีน แพนโทซิด
H 2 O 2 + 2 KI + H 2 SO 4 → I 2 + K 2 SO 4 + 2 H 2 O
I 2 + 2 Na 2 S 2 O 3 → Na 2 S 4 O 6 + 2 NaI
ตัวบ่งชี้คือแป้ง
คลอรีนไอโอดีน
นี่เป็นวิธีการที่คล้ายกับไอโอโดเมตรี แต่ในฐานะไทแทรนต์ จะใช้สารละลายไอโอดีนโมโนคลอไรด์ซึ่งมีความเสถียรมากกว่า วิธีคลอโรเมตริกไอโอดีน วิธีการไทเทรตย้อนกลับกำหนดฟีนอลและเอมีนอะโรมาติกหลัก สารที่วิเคราะห์ถูกตกตะกอนในรูปของอนุพันธ์ของไอโอดีน ไทแทรนต์ส่วนเกินจะถูกกำหนดโดยวิธีไอโอดีน:
ICI + KI → ฉัน 2 + KCI
ไอโอดาโทเมทรี
วิธีนี้ใช้กำหนดปริมาณ ตัวอย่างเช่น กรดแอสคอร์บิก สารยาถูกออกซิไดซ์ด้วยสารละลายโพแทสเซียมไอโอเดตที่ไตเตรท ไทแทรนต์ส่วนเกินถูกกำหนดโดยวิธีทางไอโอดีเมตริก ตัวบ่งชี้คือแป้ง
KIO 3 + 5 KI + 6 HCI → 3 I 2 + 6 KCI + 3 H 2 O
I 2 + 2 Na 2 S 2 O 3 → Na 2 S 4 O 6 + 2 NaI
โบรมาโตเมตรี
โพแทสเซียมโบรเมตใช้เป็นสารไทแทรนต์ ซึ่งแสดงคุณสมบัติการออกซิไดซ์ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด การพิจารณามักจะดำเนินการต่อหน้าโบรไมด์
KBrO 3 + 5 KBr + 6 HCI → 3 Br 2 + 6 KCI + 3 H 2 O
โบรมีนอิสระที่ปล่อยออกมาจะใช้กับการออกซิเดชัน (ไฮดราซีนและไฮดราไซด์) หรือโบรมีน (ฟีนอลและเอมีนอะโรมาติกหลัก) ของสารยา ตัวชี้วัด ด้วยการไทเทรตโดยตรงเป็นสีย้อม - สารประกอบเอโซ: เมทิลเรด, เมทิลออเรนจ์ - ซึ่งออกซิไดซ์และเปลี่ยนสีภายใต้การกระทำของไทแทรนต์ส่วนเกินที่จุดสมมูล
ด้วยโบรมาโตเมตรีแบบย้อนกลับจุดสิ้นสุดของการไทเทรตถูกกำหนดแบบไอโอโดเมตริก:
Br 2 + 2 KI → I 2 + 2 KBr
I 2 + 2 Na 2 S 2 O 3 → Na 2 S 4 O 6 + 2 NaI
ไดโครมาโตเมตรี
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการตกตะกอนของเกลือของเบสอินทรีย์บางชนิดด้วยสารละลายโพแทสเซียมไดโครเมตที่ไตเตรท: 2 Cl - + K 2 Cr 2 O 7 → 2 Cr 2 O 7 + 2 KCl
ไดโครเมตเบสที่ไม่ละลายน้ำจะถูกกรองออก และไทแทรนต์ส่วนเกินจะถูกกำหนดแบบไอโอโดเมตริก: K 2 Cr 2 O 7 + 6 KI +7 H 2 SO 4 → Cr 2 (SO 4) 3 + 3 I 2 + 4 K 2 SO 4 + 7 เอช 2 โอ
I 2 + 2 Na 2 S 2 O 3 → Na 2 S 4 O 6 + 2 NaI
เมทิลีนบลูและควินาครีนถูกกำหนดโดยวิธีนี้
Cerimetry
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการใช้ไตเตรทซีเรียมซัลเฟต (IV) ที่เสถียร ซึ่งลดลงเป็นซีเรียม (III) ซัลเฟตในตัวกลางที่เป็นกรด: Ce 4+ + ē → Ce 3+
การไตเตรทโดยตรงสารประกอบเหล็ก (II) ถูกกำหนด:
2 FeSO 4 + 2 Ce(SO 4) 2 → Fe 2 (SO 4) 3 + Ce 2 (SO 4) 3
ในกรณีนี้จะใช้ตัวบ่งชี้ - diphenylamine หรือ o-phenanthroline (feroin)
ที่ การไตเตรทกลับไทแทรนต์ส่วนเกินถูกกำหนดโดยวิธีทางไอโอดีเมตริกซ์:
2 Ce(SO 4) 2 + 2 KI → I 2 + Ce 2 (SO 4) 3 + K 2 SO 4
I 2 + 2 Na 2 S 2 O 3 → Na 2 S 4 O 6 + 2NaI
ความซับซ้อน
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการก่อตัวของสารประกอบเชิงซ้อนที่ละลายน้ำได้ของโลหะไอออนบวกด้วยสารละลายไทเทรตของ Trilon B - เกลือไดโซเดียมของกรดเอทิลีนไดอามีนเตตระอะซิติก ปฏิสัมพันธ์เกิดขึ้นในอัตราส่วนปริมาณสัมพันธ์ที่ 1:1 โดยไม่คำนึงถึงประจุของไอออนบวก:
CH 2 COONa CH 2 COONa
CH 2 - N CH 2 - N
CH 2 COOH CH 2 COO
CH 2 COOH + MgSO 4 → CH 2 COO Mg + H 2 SO 4
CH 2 - N CH 2 - N
CH 2 COONa CH 2 COONa
CH 2 COONa CH 2 COO
CH 2 - N CH 2 - N
CH 2 COOH CH 2 COO
CH 2 COOH + Bi 2 (SO 4) 3 → CH 2 COO Bi + H 2 SO 4 + Na 2 SO 4
CH 2 - N CH 2 - N
CH 2 COONa CH 2 COO - E \u003d M / 2
ในการไทเทรตเชิงซ้อน จะสังเกตค่า pH ช่วงหนึ่ง ซึ่งทำได้โดยใช้สารละลายบัฟเฟอร์
ตัวบ่งชี้ที่ใช้เรียกว่าตัวบ่งชี้โลหะ: KHTS (กรดโครเมียมสีน้ำเงินเข้ม), KHChS (กรดโครเมียมสีดำพิเศษ), คาเทชอลไวโอเลต, ไซลินอลออเรนจ์, กรดแคลคอนคาร์บอกซิลิก, มูเรกไซด์ ก่อนถึงจุดสมมูล ไอออนของโลหะอิสระที่มีอยู่ในสารละลายไทเทรตจะจับกับไทแทรนต์ ส่วนสุดท้ายของไทแทรนต์จะทำลายสารเชิงซ้อนของไอออนโลหะด้วยตัวบ่งชี้ ในขณะที่การก่อตัวของสารเชิงซ้อนของโลหะด้วย Trilon B และการปล่อยของ
ไอออนตัวบ่งชี้อิสระ ดังนั้นโซลูชันการไทเทรตจะได้สีของตัวบ่งชี้อิสระ
สำหรับการไทเทรตโดยตรงในสารละลายที่วิเคราะห์แล้วของเกลือแคลเซียม แมกนีเซียม สังกะสี บิสมัท ให้เพิ่มปริมาตรของสารละลายบัฟเฟอร์ที่จำเป็นเพื่อให้ได้ค่า pH ที่ต้องการและปริมาณของตัวบ่งชี้โลหะที่ระบุในบทความส่วนตัว จากนั้นไตเตรทด้วยสารละลาย Trilon B จนกระทั่งตัวบ่งชี้เปลี่ยนสีที่จุดเทียบเท่า
การไตเตรทกลับใช้หากไม่มีตัวบ่งชี้ที่เหมาะสมสำหรับการไทเทรตโดยตรง หากปฏิกิริยาของโลหะกับ Trilon B ช้า และหากโลหะถูกไฮโดรไลซ์เพื่อสร้างสารเชิงซ้อน
เมื่อวิเคราะห์เกลือของปรอทหรือตะกั่ว Trilon B ที่มากเกินไปซึ่งไม่ได้ทำปฏิกิริยากับไอออนบวกที่วิเคราะห์แล้วจะถูกไทเทรตโดยใช้สารละลายของเกลือสังกะสีหรือแมกนีเซียมเป็นไทแทรนต์ ไทเทรตยังมีตัวบ่งชี้โลหะและที่ค่า pH ที่แน่นอน
วิธีการกระจัด(หรือการไทเทรตแบบแทนที่) จะใช้เมื่อไม่สามารถเลือกตัวบ่งชี้ที่เหมาะสมได้ เช่น ในการวิเคราะห์เกลือของตะกั่ว ประการแรก ตัวอย่างเกลือแมกนีเซียมที่เป็นที่รู้จักจะถูกไตเตรทด้วย Trilon B ในบัฟเฟอร์แอมโมเนียต่อหน้าตัวบ่งชี้โลหะ จากนั้น หลังจากเปลี่ยนสีของของเหลวที่ไทเทรตแล้ว ให้เติมตัวอย่างของเกลือตะกั่วที่วิเคราะห์แล้ว ในเวลาเดียวกัน ตะกั่วไอออน ซึ่งก่อตัวเป็นสารประกอบเชิงซ้อนที่มีความเสถียรมากขึ้นด้วย Trilon B จะแทนที่ไอออนของแมกนีเซียมในปริมาณที่เท่ากัน ถัดไป ดำเนินการกำหนดปริมาณของเนื้อหาของไอออนแมกนีเซียมที่ถูกแทนที่
ไนไตรโตเมตรี
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของปฏิกิริยาระหว่างอะโรมาติกเอมีนปฐมภูมิและทุติยภูมิกับโซเดียมไนไตรต์ในตัวกลางที่เป็นกรด ต่อหน้าตัวเร่งปฏิกิริยาโพแทสเซียมโบรไมด์ และที่อุณหภูมิต่ำ
เอมีนอะโรมาติกขั้นต้น (โนโวเคน, ซัลโฟนาไมด์) ก่อรูปสารประกอบไดอะโซที่มีไทแทรนต์: Ar-NH 2 + NaNO 2 + HCl → Cl - + NaCl + 2H 2 O
เอมีนอะโรมาติกรอง (ไดเคน) ภายใต้สภาวะเดียวกันในรูปแบบสารประกอบ N-nitros: Ar-NH-R + NaNO 2 + HCl → Ar-N - R + NaCl + H 2 O
จุดสมมูลถูกกำหนดโดยใช้ตัวบ่งชี้ภายนอก (กระดาษสตาร์ชไอโอดีน), อินดิเคเตอร์ภายใน (tropeolin 00, สีแดงกลาง) หรือโพเทนชิโอเมตริก
3. การวิเคราะห์ธาตุ
ใช้สำหรับการกำหนดปริมาณของสารประกอบที่มีไนโตรเจน ฮาโลเจน กำมะถัน บิสมัท และปรอท
วิธีเจลดาห์ล
นี่เป็นวิธีการทางเภสัชวิทยาสำหรับการกำหนดไนโตรเจนในสารประกอบอินทรีย์ที่มีเอมีน อะไมด์ และเฮเทอโรไซคลิกไนโตรเจน โดยอิงจากการผสมผสานของการทำให้เป็นแร่อินทรียวัตถุตามด้วยการไทเทรตกรด-เบส ขั้นแรก ตัวอย่างจะถูกทำให้เป็นแร่โดยให้ความร้อนด้วยกรดซัลฟิวริกเข้มข้นในขวดเจลดาห์ล จากนั้นแอมโมเนียมไฮโดรซัลเฟตที่ได้รับการบำบัดด้วยด่างและแอมโมเนียที่ปล่อยออกมาจะถูกกลั่นลงในเครื่องรับด้วยกรดบอริก เป็นผลให้เกิดเมตาบอเรตแอมโมเนียมและเตตระบอเรต ซึ่งถูกไตเตรทด้วย 0.1 โมลาร์ HCl ควบคู่ไปกับการทดลองควบคุมเพื่อปรับปรุงความแม่นยำของการวิเคราะห์
สำหรับสารที่มีหมู่เอไมด์ที่ไฮโดรไลซ์ได้ง่ายในตัวกลางที่เป็นด่าง ให้ใช้ วิธีการทางอ้อมเจลดาห์ล นี่เป็นเวอร์ชันที่เรียบง่ายซึ่งไม่รวมขั้นตอนของการทำให้เป็นแร่ ยาจะถูกทำลายด้วยด่างในขวดเจลดาห์ล และแอมโมเนียที่ปล่อยออกมา (หรือไดอัลคิลลามีน) จะถูกกลั่นเข้าไปในเครื่องรับ วิธีนี้ใช้แรงงานเข้มข้น
วิธีเผาขวดด้วยออกซิเจน
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการทำลายสารอินทรีย์ที่มีฮาโลเจน กำมะถัน ฟอสฟอรัส โดยการเผาไหม้ในขวดที่เต็มไปด้วยออกซิเจนในของเหลวที่ดูดซับ และการหาองค์ประกอบในสารละลายในรูปของไอออนหรือโมเลกุล การวัดเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณดำเนินการโดยวิธีทางเคมีหรือฟิสิกส์เคมีแบบต่างๆ ข้อดีของวิธีนี้คือความเร็วของการทำให้เป็นแร่ ในการกำจัดการสูญเสียองค์ประกอบในกระบวนการการทำให้เป็นแร่ และในความไวสูงของการวิเคราะห์
สำหรับการวิเคราะห์สารอินทรีย์ที่ประกอบด้วยฮาโลเจน วิธีการอื่น ๆ ของการทำให้เป็นแร่ (ลด ออกซิเดชัน ฯลฯ) ยังใช้
การวิเคราะห์แก๊สโซเมตริก
ตรวจวัดออกซิเจนและไซโคลโพรเพน. วิธีการมีจำกัด
วิธีการวิเคราะห์ทางกายภาพและเคมี
วิธีการเหล่านี้มีลักษณะเฉพาะด้วยความรวดเร็ว, หัวกะทิ, ความไวสูง, ความเป็นไปได้ของการรวมและการทำงานอัตโนมัติ, ความเที่ยงธรรมในการประเมินคุณภาพของยาโดยส่วนที่ใช้งานทางเภสัชวิทยาของโมเลกุล ใช้วิธีการทางเคมีและฟิสิกส์เพื่อทดสอบความถูกต้อง คุณภาพดี และการกำหนดปริมาณของสารยา
ออปติคัลวิธีการจะขึ้นอยู่กับการกำหนดดัชนีการหักเหของแสงในสารละลายทดสอบ (การหักเหของแสง) การวัดการรบกวนของแสง (อินเตอร์เฟอโรเมตริก
riya) ความสามารถของสารละลายของสารในการหมุนระนาบของลำแสงโพลาไรซ์ (โพลาริเมทรี) วิธีการต่างๆ มีความโดดเด่นด้วยการบริโภคขั้นต่ำของสารที่วิเคราะห์
การดูดซึมวิธีการจะขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของสารในการดูดซับแสงในบริเวณต่างๆ ของสเปกตรัม ตัวอย่างเช่น SPF - ในสเปกตรัม UV, FEC - ในบริเวณที่มองเห็นได้ของสเปกตรัม
IR spectroscopy - ในสเปกตรัมอินฟราเรด
วิธีการขึ้นอยู่กับการปล่อยรังสี, รวมถึงการวัดแสงด้วยเปลวไฟ (วัดความเข้มของการแผ่รังสีของเส้นสเปกตรัมขององค์ประกอบที่ทดสอบ), การวัดแสง (ขึ้นอยู่กับความสามารถของสารที่จะเรืองแสงในแสงยูวี) และวิธีการทางเคมีรังสี (ตามการวัด β - หรือ γ - รังสี).
วิธีการตามการใช้สนามแม่เหล็กคือ NMR และ NMR สเปกโตรสโคปี เช่นเดียวกับแมสสเปกโตรเมทรี
ถึง เคมีไฟฟ้าวิธีการต่างๆ รวมถึงโพเทนชิโอเมทรี โดยอาศัยการวัดศักย์สมดุลที่เกิดขึ้นที่ขอบเขตระหว่างสารละลายทดสอบกับอิเล็กโทรดที่แช่อยู่ในนั้น โพลาโรกราฟีขึ้นอยู่กับการวัดความแรงของกระแสที่เกิดขึ้นบนไมโครอิเล็กโทรดระหว่างอิเล็กโตรรีดักชั่นหรืออิเล็กโทรออกซิเดชันของสารที่วิเคราะห์ในสารละลาย คูลอมเมตรีขึ้นอยู่กับการวัดปริมาณไฟฟ้าที่ใช้ไปในการลดเคมีไฟฟ้าหรือการเกิดออกซิเดชันของไอออนที่กำหนด
ถึง วิธีการแยกรวมโครมาโตกราฟีตามการแยกสารโดยการกระจายระหว่างเฟสเคลื่อนที่และอยู่กับที่ อิเล็กโตรโฟรีซิสขึ้นอยู่กับความสามารถของอนุภาคที่มีประจุเพื่อเคลื่อนที่ในสนามไฟฟ้า การสกัดจากของแข็งหรือจากสารละลายที่มีสารสกัดที่เข้ากันไม่ได้กับระยะเริ่มต้นและแยกออกจากกันได้ง่ายและจากสารที่จะสกัด
วิธีการวิเคราะห์เชิงความร้อนอยู่บนพื้นฐานของการบันทึกที่แม่นยำของสถานะสมดุลระหว่างเฟสผลึกและของเหลวของสารที่วิเคราะห์
วิธีการวิเคราะห์ทางชีวภาพ
การประเมินคุณภาพทางชีวภาพ ยา(ยาปฏิชีวนะ, ไกลโคไซด์หัวใจ, ฮอร์โมน) ดำเนินการตามความแรงของผลทางเภสัชวิทยาหรือความเป็นพิษ การทดสอบทางชีวภาพดำเนินการกับสัตว์ อวัยวะที่แยกได้แต่ละส่วน เซลล์แต่ละกลุ่ม ตลอดจนจุลินทรีย์บางสายพันธุ์ กิจกรรมของยาเสพติดแสดงเป็นหน่วย (หน่วยปฏิบัติการ) การทดสอบทางชีวภาพรวมถึงการตรวจหา pyrogenicity ในกระต่าย ความเป็นพิษในหนูทดลอง การหาปริมาณสารคล้ายฮีสตามีนในแมว
คำนิยาม รายวิชา >> ยา สุขภาพ
... วิธีการการควบคุมวัตถุดิบ ง. วิธีการการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ขั้นกลาง อี วิธีการวิเคราะห์เสร็จ ยา กองทุน... Nifantiev, O.E. ตัวย่อ เงื่อนไข และ คำจำกัดความในด้านการไหลเวียน ยา กองทุน: พจนานุกรมอ้างอิง / สพฐ. นิฟานติเยฟ, ...
ภารกิจที่สำคัญที่สุดอย่างหนึ่ง เภสัชเคมีคือการพัฒนาและปรับปรุงวิธีการประเมินคุณภาพของยา
เพื่อสร้างความบริสุทธิ์ของสารยาใช้วิธีการวิเคราะห์ทางกายภาพเคมีฟิสิกส์เคมีเคมีหรือการผสมผสานกัน
GF เสนอวิธีการควบคุมคุณภาพยาดังต่อไปนี้
วิธีการทางกายภาพและทางเคมีกายภาพ ซึ่งรวมถึง: การกำหนดอุณหภูมิหลอมเหลวและการแข็งตัว ตลอดจนขีดจำกัดอุณหภูมิของการกลั่น การหาความหนาแน่น, ดัชนีการหักเหของแสง (refractometry), การหมุนด้วยแสง (โพลาริเมทรี); สเปกโตรโฟโตเมตรี - อัลตราไวโอเลต, อินฟราเรด; photocolorimetry การปล่อยและการดูดกลืนแสงของอะตอม ฟลูออริเมทรี นิวเคลียสเรโซแนนซ์เรโซแนนซ์สเปกโทรสโกปี แมสสเปกโตรเมทรี โครมาโตกราฟี - การดูดซับ, การกระจาย, การแลกเปลี่ยนไอออน, แก๊ส, ของเหลวประสิทธิภาพสูง อิเล็กโตรโฟรีซิส (หน้าผาก, โซน, เส้นเลือดฝอย); วิธีการทางไฟฟ้า (การวัดค่า pH โพเทนชิโอเมตริก การไทเทรตแบบโพเทนชิโอเมตริก การไทเทรตแบบแอมเพอโรเมตริก โวลแทมเมทรี)
นอกจากนี้ยังสามารถใช้วิธีการที่เป็นทางเลือกแทนวิธีการทางเภสัชวิทยา ซึ่งบางครั้งมีลักษณะการวิเคราะห์ขั้นสูง (ความเร็ว ความแม่นยำในการวิเคราะห์ ระบบอัตโนมัติ) ในบางกรณี บริษัทยาซื้ออุปกรณ์ตามวิธีการที่ยังไม่ได้รวมอยู่ในตำรับยา (เช่น วิธีการของรามันสเปกโทรสโกปี - การแบ่งแยกแสง) บางครั้งแนะนำให้เปลี่ยนวิธีโครมาโตกราฟีด้วยวิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกเมื่อพิจารณาความถูกต้องหรือการทดสอบความบริสุทธิ์ วิธีการทางเภสัชวิทยาในการพิจารณาสิ่งเจือปนของโลหะหนักโดยการตกตะกอนในรูปของซัลไฟด์หรือไธโออะซีตาไมด์มีข้อเสียหลายประการ เพื่อตรวจสอบสิ่งเจือปนของโลหะหนัก ผู้ผลิตหลายรายกำลังใช้วิธีการวิเคราะห์ทางเคมีกายภาพ เช่น อะตอมมิกดูดกลืนแสงสเปกโตรเมตรีและพลาสมาอะตอมมิกอีมิซชันสเปคโตรเมทรีแบบเหนี่ยวนำคู่
ค่าคงที่ทางกายภาพที่สำคัญซึ่งระบุลักษณะความถูกต้องและระดับของความบริสุทธิ์ของยาคือจุดหลอมเหลว สารบริสุทธิ์มีจุดหลอมเหลวที่ชัดเจน ซึ่งจะเปลี่ยนแปลงเมื่อมีสิ่งสกปรก สำหรับสารยาที่มีสิ่งเจือปนที่ยอมรับได้จำนวนหนึ่ง GF จะควบคุมช่วงอุณหภูมิหลอมเหลวภายใน 2 °C แต่ตามกฎของ Raoult (AT \u003d iK3C โดยที่ AT คืออุณหภูมิการตกผลึกที่ลดลง K3 คือค่าคงตัวของการแช่แข็ง C คือความเข้มข้น) ที่ i \u003d 1 (ไม่ใช่อิเล็กโทรไลต์) ค่าของ AG ไม่สามารถเป็นได้ เหมือนกันสำหรับสารทั้งหมด สิ่งนี้เชื่อมโยงไม่เพียง แต่กับเนื้อหาของสิ่งเจือปนเท่านั้น แต่ยังรวมถึงธรรมชาติของตัวยาด้วยเช่นด้วยค่าคงที่ของความเย็น K3 ซึ่งสะท้อนถึงการลดลงของฟันกรามในจุดหลอมเหลวของยา ดังนั้น AT = 2 °C เท่ากันสำหรับการบูร (K3 = 40) และฟีนอล (K3 = 7.3) เศษส่วนมวลสิ่งเจือปนไม่เท่ากันและมีปริมาณ 0.76 และ 2.5% ตามลำดับ
สำหรับสารที่ละลายด้วยการสลายตัว มักจะระบุอุณหภูมิที่สารสลายตัวและมีการเปลี่ยนแปลงลักษณะที่ปรากฏอย่างชัดเจน
ในบทความส่วนตัวของ GF X ขอแนะนำให้กำหนดจุดแข็งตัวหรือจุดเดือด (ตาม GF XI - "ขีดจำกัดอุณหภูมิการกลั่น") สำหรับยาเหลวจำนวนหนึ่ง จุดเดือดควรอยู่ภายในช่วงเวลาที่กำหนดในบทความส่วนตัว
ช่วงที่กว้างขึ้นบ่งชี้ว่ามีสิ่งสกปรก
ในบทความส่วนตัวจำนวนมากของ GF X ให้ค่าความหนาแน่นที่อนุญาตซึ่งมีความหนืดน้อยกว่าซึ่งยืนยันความถูกต้องและคุณภาพของยา
บทความส่วนตัวเกือบทั้งหมดของ SP X ทำให้ปกติตัวบ่งชี้คุณภาพของยาเป็นความสามารถในการละลายในตัวทำละลายต่างๆ การปรากฏตัวของสิ่งเจือปนในยาอาจส่งผลต่อความสามารถในการละลาย ลดลงหรือเพิ่มขึ้น ขึ้นอยู่กับลักษณะของสิ่งเจือปน
เกณฑ์ความบริสุทธิ์ยังเป็นสีของยาและ / หรือความโปร่งใสของรูปแบบยาที่เป็นของเหลว
เกณฑ์บางอย่างสำหรับความบริสุทธิ์ของยาอาจเป็นค่าคงที่ทางกายภาพเช่นดัชนีการหักเหของแสงในสารละลายของสารทดสอบ (การหักเหของแสง) และการหมุนเฉพาะเนื่องจากความสามารถของสารจำนวนหนึ่งหรือสารละลายในการหมุน ระนาบโพลาไรซ์เมื่อแสงโพลาไรซ์ระนาบผ่าน (โพลาไรซ์) วิธีการกำหนดค่าคงที่เหล่านี้เกี่ยวข้องกับวิธีการวิเคราะห์เชิงแสงและยังใช้เพื่อสร้างความถูกต้องและการวิเคราะห์เชิงปริมาณของยาและรูปแบบขนาดการให้ยา
เกณฑ์สำคัญสำหรับคุณภาพที่ดีของยาหลายชนิดคือปริมาณน้ำ การเปลี่ยนแปลงในตัวบ่งชี้นี้ (โดยเฉพาะระหว่างการเก็บรักษา) สามารถเปลี่ยนความเข้มข้นของสารออกฤทธิ์ได้ ส่งผลให้ฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาและทำให้ยาไม่เหมาะสมต่อการใช้งาน
วิธีการทางเคมี สิ่งเหล่านี้รวมถึง: ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพเพื่อความถูกต้อง ความสามารถในการละลาย การหาสารระเหยและน้ำ การหาปริมาณไนโตรเจนในสารประกอบอินทรีย์ วิธีการไททริเมทริก (การไทเทรตกรด-เบส การไทเทรตในตัวทำละลายที่ไม่ใช่น้ำ , เลขอีเทอร์ เลขไอโอดีน ฯลฯ
วิธีการทางชีวภาพ วิธีการทางชีวภาพในการควบคุมคุณภาพยานั้นมีความหลากหลายมาก ในหมู่พวกเขามีการทดสอบความเป็นพิษ, หมัน, ความบริสุทธิ์ของจุลินทรีย์
เพื่อทำการวิเคราะห์ทางกายภาพและเคมีของผลิตภัณฑ์กึ่งผลิตภัณฑ์ สารยา และรูปแบบการให้ยา เมื่อตรวจสอบคุณภาพเพื่อให้เป็นไปตามข้อกำหนดของ FS ห้องปฏิบัติการควบคุมและวิเคราะห์จะต้องติดตั้งชุดอุปกรณ์และเครื่องมือขั้นต่ำดังต่อไปนี้:
IR spectrophotometer (เพื่อตรวจสอบความถูกต้อง);
สเปกโตรโฟโตมิเตอร์สำหรับสเปกโตรมิเตอร์ในบริเวณที่มองเห็นได้และยูวี
อุปกรณ์สำหรับโครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง (TLC) (การกำหนดความถูกต้อง, สิ่งเจือปนที่เกี่ยวข้อง);
โครมาโตกราฟีสำหรับโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) (การรับรองความถูกต้อง การหาปริมาณ การหาสิ่งเจือปนที่เกี่ยวข้อง ความสม่ำเสมอของการจ่ายยา ความสามารถในการละลาย);
โครมาโตกราฟีแบบแก๊ส-ของเหลว (GLC) (เนื้อหาของสิ่งเจือปน การกำหนดความสม่ำเสมอของการจ่ายยา);
โพลาริมิเตอร์ (การกำหนดความถูกต้อง, การกำหนดเชิงปริมาณ);
โพเทนชิออมิเตอร์ (การวัดค่า pH การกำหนดปริมาณ);
สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ดูดกลืนอะตอม (การวิเคราะห์องค์ประกอบของโลหะหนักและอโลหะ);
เครื่องไตเตรท K. Fischer (การกำหนดปริมาณน้ำ);
derivatograph (การกำหนดการลดน้ำหนักระหว่างการอบแห้ง)
UDC 615.015:615.07:53
การวิเคราะห์ยาสำหรับเภสัชจลนศาสตร์
การวิจัย
Dmitry Vladimirovich Reyhart1, Viktor Vladimirovich Chistyakov2
แผนกองค์กรและการจัดการในแวดวงการไหลเวียนของยา (หัวหน้า - สมาชิกที่สอดคล้องกันของ Russian Academy of Medical Sciences, Prof. R.U. Khabriev) ของสถาบันการแพทย์แห่งรัฐมอสโก พวกเขา. เซเชนอฟ
2 Center for Chemistry of Medicinal Products - VNIHFI (ผู้อำนวยการทั่วไป - K.V. Shilin), มอสโก
ทบทวนวิธีการวิเคราะห์ที่ละเอียดอ่อนและเฉพาะเจาะจงที่ใช้ในการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์ของยา ข้อดีและข้อจำกัดของการใช้เอ็นไซม์อิมมูโนแอสเซย์ โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพร้อมการตรวจจับด้วยฟลูออเรสเซนต์และแมสสเปกโตรเมทรี การใช้วิธีการเฉพาะในการประเมินเภสัชจลนศาสตร์ของยาในแต่ละกรณีจะพิจารณาจากโครงสร้างของสารประกอบทดสอบและอุปกรณ์ของห้องปฏิบัติการ
คีย์เวิร์ดคำสำคัญ: โครมาโตกราฟีของเหลว การตรวจจับฟลูออเรสเซนต์และแมสสเปกโตรเมทริก เอ็นไซม์อิมมูโนแอสเซย์ เภสัชจลนศาสตร์
การศึกษาเภสัชจลนศาสตร์ขึ้นอยู่กับการประเมินความเข้มข้นในร่างกายของผู้ป่วยของสารยา (PM) ในช่วงเวลาหนึ่งหลังจากรับประทานยา วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือเลือด (ทั้งหมด เซรั่ม พลาสมา) ปัสสาวะ น้ำลาย อุจจาระ น้ำดี น้ำคร่ำ ฯลฯ ตัวอย่างเลือดและปัสสาวะที่เข้าถึงได้มากที่สุดและได้รับการศึกษาบ่อยที่สุด
การวัดความเข้มข้นของยาสามารถแบ่งออกเป็นสองขั้นตอน: 1 - การแยกสารตัวยาเฉพาะออกจากวัตถุทางชีววิทยา ความเข้มข้นของสารประกอบทดสอบ การแยกสารจากส่วนประกอบภายในหลัก 2 - การแยกสารผสม การระบุตัวยา และการวิเคราะห์เชิงปริมาณ
การศึกษาความเข้มข้นของยาในเลือดให้ข้อมูลเกี่ยวกับระยะเวลาของการไหลเวียนของยาในร่างกาย, การดูดซึมของยา, ผลของความเข้มข้นต่อผลทางเภสัชวิทยา, ปริมาณการรักษาและความตาย, พลวัตของการก่อตัว ของสารออกฤทธิ์หรือสารที่เป็นพิษ
การศึกษาความเข้มข้นของยาในปัสสาวะช่วยให้คุณสามารถประเมินอัตราการกำจัดยาและการทำงานของไต ความเข้มข้นของสารเมตาโบไลต์ในปัสสาวะเป็นตัวบ่งชี้ทางอ้อมของกิจกรรมการเผาผลาญของเอนไซม์
การศึกษาวัสดุชีวภาพ ได้แก่ การวัดมวล (ปริมาตร) ของตัวอย่าง การปล่อยตัวยา (เมแทบอไลต์) จาก 532
เซลล์ตัวอย่าง การแยกเซลล์ทั้งหมด (เช่น เมื่อวิเคราะห์เลือด) หรือบางส่วนของเซลล์ (เมื่อวิเคราะห์เนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกัน) การเพิ่มมาตรฐานภายใน การแยกโปรตีน การทำให้ตัวอย่างบริสุทธิ์ (การหมุนเหวี่ยง การกรอง) การสกัด การสกัดกลับ ความเข้มข้นและ การแปลงสารทดสอบให้เป็นประโยชน์สำหรับการวิเคราะห์อนุพันธ์ ขั้นตอนหลักสำหรับการประมวลผลตัวอย่างเลือดและปัสสาวะ ตามลำดับ (รูปที่ 1)
วิธีการวิเคราะห์ที่ "เหมาะสม" สำหรับการวัดความเข้มข้นของยาควรมีความไวสูง ความจำเพาะและความสามารถในการทำซ้ำ ความสามารถในการทำงานกับปริมาณน้อย ความง่ายในการเตรียมวัสดุ ต้นทุนต่ำและความสะดวกในการบำรุงรักษาอุปกรณ์ ความน่าเชื่อถือและระบบอัตโนมัติ ความสะดวกในการทำงานของบุคลากรและความเก่งกาจ (ความสามารถในการวิเคราะห์ยาประเภทต่างๆ) .
เพื่อให้ได้ข้อมูลที่เชื่อถือได้ จำเป็นต้องแก้ไขความเสถียรของสารออกฤทธิ์และ/หรือผลิตภัณฑ์ รวมถึงระดับการเปลี่ยนแปลงทางชีวภาพของสารในสื่อชีวภาพที่วิเคราะห์
การตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการควรเป็นไปตามการใช้งานที่ต้องการ และการสอบเทียบควรคำนึงถึงช่วงความเข้มข้นของตัวอย่างทดสอบด้วย เราไม่แนะนำอย่างยิ่งให้ใช้วิธีการวิเคราะห์ตัวอย่างสองวิธีหรือมากกว่ากับวัสดุชนิดเดียวกันที่มีค่าการสอบเทียบช่วงใกล้เคียงกัน
มีวิธีการมากมายในการกำหนดความเข้มข้นของยาในของเหลวทางชีวภาพ: โครมาโตกราฟี, จุลชีววิทยา, สเปกโตรโฟโตเมตริก, โพลาโรกราฟิก, ภูมิคุ้มกัน (ภูมิคุ้มกันวิทยุ, อิมมูโนเอนไซม์), ไอโซโทปรังสีและวิธีการอื่น ๆ
พารามิเตอร์ที่สำคัญของวิธีการคือความไว ความเร็ว ความแม่นยำ ความสามารถในการทำงานกับวัสดุชีวภาพและต้นทุนเพียงเล็กน้อย
ในตาราง. 1 เปรียบเทียบวิธีการวิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์ยา
ในทางปฏิบัติอย่างกว้างขวางที่สุด (มากถึง 95% ของการศึกษา) คือวิธีการที่มีประสิทธิภาพสูง
ข้าว. 1. ขั้นตอนพื้นฐานในการจัดการตัวอย่างเลือดและปัสสาวะ
noah liquid chromatography (HPLC) พร้อมการตรวจจับประเภทต่างๆ
ข้อดีของ HPLC ที่เปรียบเทียบ ตัวอย่างเช่น กับโครมาโตกราฟีแบบแก๊ส-ของเหลว (GLC) คือไม่มีข้อจำกัดเกี่ยวกับความเสถียรทางความร้อนของสารเตรียมที่วิเคราะห์ ความสามารถในการทำงานกับสารละลายในน้ำและสารประกอบระเหยง่าย และการใช้ “เฟสปกติ ” และตัวเลือกโครมาโตกราฟีแบบย้อนกลับ การตรวจจับหลายประเภทไม่ทำลาย
เอ็นไซม์อิมมูโนแอสเซย์, HPLC พร้อมการตรวจหาฟลูออเรสเซนต์, HPLC พร้อมการตรวจจับแมสสเปกโตรเมตรี ซึ่งปัจจุบันใช้อย่างแข็งขันในการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์
วิธี ELISA
วิธีการของเอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์ (ELISA) ถูกเสนอในช่วงต้นทศวรรษที่ 70 ของศตวรรษที่ผ่านมา หลักการของ ELISA คือปฏิกิริยาของโปรตีนโปรตีนจำเพาะ
ลักษณะเปรียบเทียบของวิธีการวิเคราะห์ยา
วิธีการ ความไวสัมบูรณ์, g ความไว, ความซับซ้อนของคะแนน, จุด Selectivity, คะแนน Universality การประเมินทั้งหมด, คะแนน
โครมาโตกราฟีของเหลว:
เครื่องตรวจจับรังสียูวี 10-7 3 -3 4 4 8
เครื่องตรวจจับเรืองแสง 10-8 - 10-9 4 -3 5 2 8
เครื่องตรวจจับมวลสาร 10-11 - 10-12 5 -5 5 4 9
ภูมิคุ้มกัน 10-10 - 10-11 5 -1 4 1 9
แก๊สโครมาโตกราฟี:
เครื่องตรวจจับการจับอิเล็กตรอน 10-10 5 -4 4 2 7
เครื่องตรวจจับเปลวไฟไอออไนซ์ 10-8 - 10-9 4 -3 2 4 7
ไมล์; วิธีการตรวจจับที่ใช้ใน HPLC มีความจำเพาะสูงกว่า
ให้เราพิจารณาคุณสมบัติของวิธีการที่มีความไวสูงที่ช่วยให้เราสามารถวิเคราะห์ปริมาณยานาโนกรัมได้ (ตารางที่ 1):
ร่างกายที่มีสารวิเคราะห์ทำหน้าที่เป็นแอนติเจน ยิ่งความเข้มข้นของสารแอนติเจนสูงเท่าใด คอมเพล็กซ์ของแอนติเจนและแอนติบอดีก็จะยิ่งก่อตัวมากขึ้น สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของการก่อตัวที่ซับซ้อนที่
การเปลี่ยนแปลงสองวิธี - ด้วยการแยกเบื้องต้นของความซับซ้อน (วิธีที่ต่างกัน) หรือไม่มีการแยก (วิธีการที่เป็นเนื้อเดียวกัน) ไม่ว่าในกรณีใด ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นของสารวิเคราะห์ที่ไม่ทราบสาเหตุจะถูกเติมลงในซีรัม โดยที่แอนติบอดีถูกสร้างสารเชิงซ้อนด้วยอะนาล็อกที่ติดฉลากของสารที่วิเคราะห์ และสารจากสารที่วิเคราะห์จะถูกแทนที่จากสารเชิงซ้อน ปริมาณของอะนาล็อกที่ติดฉลากแบบแทนที่เป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของสารในตัวอย่าง เมื่อพิจารณาแล้วว่าอะนาล็อกที่ติดฉลากถูกแทนที่จากคอมเพล็กซ์มากน้อยเพียงใด (หรือในทางกลับกัน ยังคงถูกผูกมัด) เป็นไปได้ที่จะคำนวณระดับของสารที่ต้องการในตัวอย่าง การสอบเทียบล่วงหน้าดำเนินการโดยใช้สารละลายมาตรฐาน (ด้วยความเข้มข้นมาตรฐานของสารทดสอบ)
มีการผลิตชุดรีเอเจนต์ - การวินิจฉัยที่เรียกว่า (antiserum, เอนไซม์, ซับสเตรต, โคแฟกเตอร์, โซลูชันมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบรวมกับยา) ออกแบบมาสำหรับการทดสอบ 50-200 สำหรับการวิเคราะห์ โดยปกติแล้ว 0.05-0.2 มิลลิลิตรของซีรัมในเลือดของผู้ป่วยก็เพียงพอแล้ว
วิธีอิมมูโนเอนไซม์มีความไวและความจำเพาะสูง ชุดตรวจวินิจฉัยมีราคาถูกและมีอายุการเก็บรักษานานกว่าชุดตรวจภูมิคุ้มกันด้วยรังสี เมื่อใช้ ELISA ความจำเป็นในการแยกสารเชิงซ้อนของแอนติเจน-แอนติบอดีจะหมดไป ซึ่งเป็นขั้นตอนที่ค่อนข้างซับซ้อน โดยมีความเสี่ยงสูงที่จะเกิดข้อผิดพลาด วิธี immunoenzymatic สามารถทำได้ในโรงพยาบาลหรือห้องปฏิบัติการผู้ป่วยนอก อุปกรณ์ได้รับการพัฒนาที่ให้การวิเคราะห์อัตโนมัติเต็มรูปแบบ
วิเคราะห์ง่าย มีความไวสูง แม่นยำ ทำซ้ำได้
ราคาอุปกรณ์และรีเอเจนต์ในระดับปานกลาง - ทั้งหมดนี้สร้างโอกาสในการนำวิธีการทางภูมิคุ้มกันมาใช้อย่างกว้างขวางในการปฏิบัติทางการแพทย์
โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพร้อมการตรวจจับการเรืองแสง
ใน HPLC เครื่องตรวจจับจะสร้างสัญญาณไฟฟ้าที่มีความแรงเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของสารที่วิเคราะห์ที่ละลายในเฟสเคลื่อนที่ ในโครมาโตกราฟีของเหลวครั้งแรก (การแลกเปลี่ยนไอออน) เฟสเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ที่มีส่วนประกอบตัวอย่างถูกรวบรวมในภาชนะขนาดเล็ก จากนั้นใช้ไทโตรเมทรี การวัดสี โพลาโรกราฟี ฯลฯ เนื้อหาของส่วนประกอบในส่วนนี้ถูกกำหนด กล่าวคือ กระบวนการแยกตัวอย่าง
และคำจำกัดความขององค์ประกอบเชิงปริมาณถูกแยกออกจากกันในเวลาและพื้นที่ ในโครมาโตกราฟีของเหลวที่ทันสมัย กระบวนการเหล่านี้มีให้โดยเครื่องมือเดียว
คุณสมบัติทางเคมีกายภาพใดๆ ของเฟสเคลื่อนที่ (การดูดกลืนหรือการปล่อยแสง การนำไฟฟ้า ดัชนีการหักเหของแสง ฯลฯ) ที่เปลี่ยนแปลงต่อหน้าโมเลกุลของสารประกอบที่แยกออกได้ สามารถใช้ตรวจจับส่วนประกอบตัวอย่างได้ จากวิธีการตรวจหาทางกายภาพเคมีที่มีอยู่ 50 วิธี ปัจจุบันมีการใช้ 5-6 วิธี
ความไวเป็นลักษณะที่สำคัญที่สุดของเครื่องตรวจจับ หากความไวถูกกำหนดในแง่ของแอมพลิจูดสองเท่าของสัญญาณรบกวนของเส้นศูนย์ และเสียงแสดงเป็นหน่วยทางกายภาพ ความไวของเครื่องตรวจจับโฟโตเมตริกจะแสดงเป็นหน่วยของความหนาแน่นเชิงแสง ความไวของเครื่องตรวจจับการหักเหของแสง จะแสดงเป็นหน่วยของดัชนีการหักเหของแสง ตัวตรวจวัดโวลแทมเมตริกในหน่วยแอมแปร์ และตัวตรวจวัดค่าการนำไฟฟ้าในซีเมนส์ ในการวิเคราะห์ทางเภสัชกรรม ความไวจะแสดงในรูปของปริมาณสารที่วิเคราะห์ขั้นต่ำ ระดับความไวของเครื่องตรวจจับประเภทต่างๆ แสดงไว้ในตาราง หนึ่ง.
แม้ว่าโครมาโตกราฟี 80% จะได้รับการติดตั้งเป็นอุปกรณ์มาตรฐานด้วยเครื่องตรวจจับสเปกโตรโฟโตเมตริก แต่การตรวจจับการเรืองแสงเริ่มแพร่หลายมากขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อพิจารณาความเข้มข้นของสารประกอบที่สามารถ "เรืองแสง" ภายใต้การกระทำของรังสีที่น่าตื่นเต้น ความเข้มของการเรืองแสงเป็นสัดส่วนกับความเข้มของแสงที่น่าตื่นเต้น การศึกษาสเปกตรัมการแผ่รังสี (ฟลูออเรสเซนส์และฟอสฟอรัสเรสเซนซ์) เป็นวิธีการที่มีความละเอียดอ่อนและเฉพาะเจาะจงมากกว่าการศึกษาสเปกตรัมการดูดกลืนแสง
สเปกตรัมการเรืองแสงของสารในหลายกรณีเป็นการสะท้อนกระจกของแถบดูดกลืนที่มีพลังงานต่ำที่สุด และมักจะตั้งอยู่ถัดจากแถบนี้ในด้านความยาวคลื่นยาว วิธีนี้สะดวกที่สุดในการศึกษายาที่มีการเรืองแสงของตัวเอง (คลอโรควิน, ด็อกโซรูบิซิน, ด็อกซาโซซิน, atenolol, อินโดเมธาซิน, โพรพาโนลอล, เตตราไซคลีน, ควินิดีน ฯลฯ ) ยาบางชนิดสามารถเปลี่ยนเป็นสารประกอบเรืองแสงได้ง่าย (กระบวนการทำให้เกิดอนุพันธ์) เช่น ไฮโดรคอร์ติโซน (การบำบัดด้วยกรดซัลฟิวริก), เมเพอริดีน (การควบแน่นด้วยฟอร์มัลดีไฮด์), 6-เมอร์แคป-โทพูรีน และเมโธเทรกเซต (การออกซิเดชันด้วยโพแทสเซียมเปอร์แมงกาเนต) ยาอื่นๆ ที่มีสารออกฤทธิ์ กลุ่มงานสามารถควบแน่นด้วยรีเอเจนต์เรืองแสงได้
gentami - fluorescamine (chlordeazepoxide, novocainamide, sulfonamides ฯลฯ ), 7-nitrobenzo-2,1,3-oxadiazole (propoxyphene ฯลฯ ) เป็นต้น ในเวลาเดียวกัน ควรสังเกตว่าด้วยความไวและความสามารถในการคัดเลือกสูง วิธีการตรวจจับฟลูออเรสเซนต์จะถูกจำกัดโดยกลุ่มยาที่มีการเรืองแสงตามธรรมชาติ และกระบวนการอนุพันธ์ในการวิเคราะห์เชิงปริมาณมีค่าใช้จ่ายสูง
โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพร้อมการตรวจจับมวลสาร
เครื่องตรวจจับ HPLC รุ่นใหม่ที่มีความไวสูงซึ่งใช้สำหรับการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์คือแมสสเปกโตรมิเตอร์ เครื่องตรวจจับมวลสารสามารถลดเวลาการวิเคราะห์ได้อย่างมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่ง โดยการกำจัดขั้นตอนการเตรียมการ (การสกัด) วิธีนี้ทำให้สามารถระบุสารหลายชนิดพร้อมกันได้ และช่วยขจัดข้อผิดพลาดที่เกี่ยวข้องกับส่วนประกอบที่แยกออกไม่ได้
Mass spectrometry เป็นหนึ่งในวิธีที่มีแนวโน้มมากที่สุดสำหรับการวิเคราะห์ทางเคมีกายภาพของยา ตามเนื้อผ้าแมสสเปกโตรเมตรีอินทรีย์ใช้เพื่อแก้ปัญหาหลักสองประการ: การระบุสารและการศึกษาการกระจายตัวของโมเลกุลที่แตกตัวเป็นไอออนในเฟสของก๊าซ การผสมผสานระหว่างแมสสเปกโตรมิเตอร์กับโครมาโตกราฟีของเหลวช่วยเพิ่มความเป็นไปได้ของวิธีการแบบคลาสสิกอย่างมีนัยสำคัญ ด้วยการถือกำเนิดของวิธีการไอออไนซ์แบบใหม่ เช่น "electrospray" (ESI - English electrospray ionization - ionization in an electric field at aความดันบรรยากาศ) และ "MALDI" - ionization โดย laser desorption รายชื่อโมเลกุลที่สามารถศึกษาได้โดยวิธีนี้ ได้ขยายตัวอย่างมาก
ปัจจุบัน การผสมผสานระหว่าง HPLC และเครื่องตรวจจับมวลสารแบบ "อิเล็กโทรสเปรย์" ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์และชีวสมมูลของยา เริ่มแรกวิธี ESI ได้รับการพัฒนาภายใต้การดูแลของ L.N. Gall และในปี 2545 D. Fennu และ K. Tanaka ได้รับรางวัลโนเบลสำหรับการพัฒนาวิธีการในการระบุและวิเคราะห์โครงสร้างของโมเลกุลขนาดใหญ่ทางชีววิทยาและโดยเฉพาะอย่างยิ่งวิธีการสำหรับการวิเคราะห์มวลสารของโมเลกุลทางชีววิทยา กลไกการก่อตัวของอนุภาคไอออไนซ์มีสามขั้นตอน ประการแรกคือการก่อตัวของหยดประจุที่ส่วนเส้นเลือดฝอย ผ่านแรงดันไฟฟ้าที่ใช้ประจุจะถูกกระจายในสารละลายไอออนบวกจะถูกดักจับ
ไหลออกมาที่ทางออก ด้วยสนามที่แข็งแกร่ง (3-5 kV) เครื่องบินไอพ่นจะก่อตัวขึ้นจากด้านบนของกรวยซึ่งจะกระจายเป็นหยดเล็ก ๆ ขั้นตอนที่สองคือการลดขนาดของหยดประจุทีละน้อยทีละน้อยเนื่องจากการระเหยของตัวทำละลายและการแตกตัวของหยดต่อมาจนถึงการก่อตัวของไอออนจริง ละอองที่มีประจุจะเคลื่อนผ่านชั้นบรรยากาศไปยังอิเล็กโทรดที่อยู่ตรงข้าม ขั้นตอนที่สามคือวงจรซ้ำของการแยกและการลดปริมาตรของหยดจนกระทั่งการระเหยของตัวทำละลายและการเกิดไอออนในเฟสของแก๊สหมดลงอย่างสมบูรณ์
ระบบ LC/MS สมัยใหม่ (LC/MS - liquid chromatography/mass-spectrometry) ทำให้สามารถลงทะเบียนกระแสไอออนทั้งหมด (TIC - กระแสไอออนทั้งหมด) ควบคุมไอออนที่ระบุ (SIM - การตรวจสอบไอออนที่เลือก) และควบคุมปฏิกิริยาที่ระบุ การตรวจสอบปฏิกิริยาแบบเลือก (SRM - การตรวจสอบปฏิกิริยาที่เลือกภาษาอังกฤษ)
การวิเคราะห์กระแสไอออนิกทั้งหมด (TIC) ให้ข้อมูลเกี่ยวกับสารประกอบทั้งหมดที่ออกจากคอลัมน์โครมาโตกราฟีตามลำดับ แมสโครมาโตแกรมคล้ายกับโครมาโตแกรมที่มีการตรวจจับรังสียูวี โดยพื้นที่ใต้ยอดจะสัมพันธ์กับปริมาณของสาร เมื่อกำหนดอิออนเป้าหมาย (SIM) ผู้ปฏิบัติงานสามารถจำกัดช่วงการตรวจจับของสารประกอบที่ต้องการได้โดยการแยกสาร เช่น สารเล็กน้อย วิธี SRM มีความไวและความจำเพาะสูงสุดเมื่อกระแสไอออนถูกบันทึกโดยใช้คุณลักษณะไอออนที่เลือกมาหนึ่งของสารประกอบภายใต้การศึกษา (ในการแตกตัวเป็นไอออนของ ESI และการลงทะเบียนของไอออนบวก โดยปกติแล้วจะเป็น MH+ โมเลกุลไอออน)
เอกสารที่ตีพิมพ์ล่าสุดกล่าวถึงความเป็นไปได้ของการวิเคราะห์เชิงปริมาณของสารอินทรีย์ในวัตถุทางชีววิทยาโดยไม่ต้องแยกโครมาโตกราฟีโดยใช้การตรวจจับแบบหลายจุดและการควบคุมภายในในรูปแบบของอะนาล็อกที่ติดฉลากดิวเทอเรียม โดยเฉพาะอย่างยิ่ง สำหรับโมเลกุลของธรรมชาติของไขมันนั้น ช่วงความเข้มข้น (จากพิโค- ถึงนาโนโมลาร์) ถูกกำหนดโดยผู้เขียนสังเกตเห็นการพึ่งพาเชิงเส้นของความเข้มของกระแสไอออนต่อความเข้มข้นของสาร การเพิ่มความเข้มข้นของสารประกอบในสารละลายทำให้เกิดปฏิกิริยาระหว่างไอออนกับโมเลกุลในระหว่างการแตกตัวเป็นไอออนและการละเมิดความเป็นเส้นตรง
วิธีการสำหรับการกำหนดปริมาณของพรอสตาแกลนดินและกรดไขมันไม่อิ่มตัวเชิงซ้อนโดยใช้อิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนเซชัน - แมสสเปกโตรเมตรีโดยไม่มีการแยกโครมาโตกราฟีโดยใช้มาตรฐานภายในและการลงทะเบียนของไอออนลบได้อธิบายไว้ ในการทำงาน
ยู.โอ. Caratasso และ IV Logunova ความไวของแมสสเปกโตรเมตรีในการศึกษาสารต้านการเต้นของหัวใจที่เป็นไปได้คือ 3 ng/0.5 ml ของพลาสม่าในเลือด
เมื่อเลือกวิธีการวิเคราะห์ ต้องคำนึงว่าการใช้ ELISA นั้นจำกัดด้วยการมีอยู่ของรีเอเจนต์ที่จำเป็น การตรวจจับฟลูออเรสเซนต์ และความจำเป็นในการเรืองแสงที่แท้จริงในสารประกอบทดสอบ แม้ว่าข้อจำกัดข้างต้นจะไม่มีความสำคัญสำหรับการตรวจจับแมสสเปกโตรเมตรี แต่ต้นทุนของอุปกรณ์ในปัจจุบันยังคงค่อนข้างสูง และการวิเคราะห์ประเภทนี้ต้องใช้ทักษะพิเศษ
วรรณกรรม
1. Aleksandrov M.L. , Gall L.N. , Krasnov N.V. การสกัดไอออนจากสารละลายที่ความดันบรรยากาศ - วิธีใหม่ในการวิเคราะห์แมสสเปกโตรเมทริก // Dokl. อเคด. วิทยาศาสตร์ของสหภาพโซเวียต - 2527. - ท.277. - ลำดับที่ 2 -
2. Karatasso Yu.O. , Logunova IV, Sergeeva MG และคณะ การวิเคราะห์เชิงปริมาณของยาในพลาสมาเลือดโดยใช้อิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนซ์ - แมสสเปกโตรเมตรีโดยไม่ต้องแยกโครมาโตกราฟี // Khim. ฟาร์ม. นิตยสาร - 2550. - ลำดับที่ 4 - ส. 161-166.
3. Karatasso Yu.O. , Alyoshin S.E. , Popova N.V. การวิเคราะห์เชิงปริมาณของพรอสตาแกลนดินและกรดไขมันไม่อิ่มตัวเชิงซ้อนโดยแมสสเปกโตรเมทรีด้วยอิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนซ์ // แมสสเปกโตรเมทรี -2007. - V.4. - ที่ 3 - ส. 173-178.
4. Kholodov L.E. , Yakovlev V.P. เภสัชจลนศาสตร์คลินิก - ม.: แพทยศาสตร์, 2528. - 463 น.
5. Covey T.R. , Lee E.D. , Henion J.D. โครมาโตกราฟีของเหลวความเร็วสูง/แมสสเปกโตรเมตรีแบบตีคู่สำหรับการกำหนดยาในตัวอย่างทางชีวภาพ // Anal. เคมี. - 2529. - ฉบับ. 58 (12). - ป. 2453-2460.
6. รายงานการประชุมเกี่ยวกับการตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการวิเคราะห์: การดูดซึม ชีวสมมูล และการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์ // J. Pharmac วิทย์ - 2535. - เล่มที่ 81. - หน้า 309-312.
7. De Long C.J., Baker P.R.S., SamuelM. และคณะ องค์ประกอบระดับโมเลกุลของฟอสโฟลิปิดในตับของหนูโดย ESI-MS/ MS: ผลของโครมาโตกราฟี//J. ลิปิด Res. - 2544. - ฉบับที่. 42. - ป. 2502-2511.
8. Electrospray Ionization Mass Spectrometry เอ็ด. อาร์ บี โคล // ไวลีย์ - นิวยอร์ก, 1997.
9. Han X. , Yang K. , Yang J. et al. ปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อการแยกสารในแหล่งกำเนิดด้วยไฟฟ้าและการคัดเลือกไอออไนซ์ของกลีเซอโรฟอสโฟลิปิด // Am. ซ. มวลสาร - 2549. - ฉบับ. 17(2). - หน้า 264-274.
10. Koivusalo M. , Haimi P. , Heikinheimo L. และคณะ การกำหนดเชิงปริมาณขององค์ประกอบฟอสโฟลิปิดโดย ESI-MS: ผลของความยาวของสายเอซิล ความไม่อิ่มตัว และความเข้มข้นของไขมันต่อการตอบสนองของเครื่องมือ // J. Lipid Res. - 2544. - ฉบับที่. 42.-ป. 663-672.
11. Lee M.S. , Kerns E.H. การประยุกต์ใช้ LC/MS ในการค้นคว้ายา//แมสสเปกตรัม รายได้ - 2542. - ฉบับที่. 18(3-4). - หน้า 187-279.
ได้รับเมื่อ 05/28/10
การวิเคราะห์ยาในการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์
ดี.วี. Reikhart, V.V. Chistyakov
ดำเนินการเป็นการทบทวนวิธีการวิเคราะห์ที่มีความละเอียดอ่อนและเฉพาะเจาะจงสำหรับการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์ของยา แสดงให้เห็นข้อดีและข้อจำกัดของการวิเคราะห์ภูมิคุ้มกัน-เอนไซม์ โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงพร้อมการเรืองแสงและการตรวจจับแมสสเปกโตรเมทรี การใช้วิธีการในการประเมินเภสัชจลนศาสตร์ของยาในแต่ละกรณีควรพิจารณาจากโครงสร้างของสารประกอบและอุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการ
คำสำคัญ: โครมาโตกราฟีของเหลว การตรวจหาสารเรืองแสงและแมสสเปกโตรเมทรี การวิเคราะห์เอนไซม์ภูมิคุ้มกัน เภสัชจลนศาสตร์